乳酸脫氫酶(LDH)測試盒

商品詳情：
測定意義：

LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成酸，酸進(jìn)一步與2, 4 - 二肼作用生成酸二腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與酸濃度成正比。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中AA提取：

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來水冷卻后，8000g，，4℃離心10min，上清液置冰上待測。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3.血清等液體：直接檢測。

計(jì)算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計(jì)算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬。

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乳酸脫氫酶(LDH)測試盒

T4 RNA Ligase規(guī)格：1000 units

Endonuclease V, T.maritima規(guī)格：250 units

Micrococcal Nuclease規(guī)格：8000 units

Exonuclease III規(guī)格：4000 units

分枝桿菌DNAout

土壤DNAout

細(xì)菌DNAout（250次）

細(xì)菌DNAout（50次）

一步式細(xì)菌DNAout

柱式分枝桿菌DNAout

柱式水樣DNAout

柱式土壤DNAout

柱式微生物基因組DNAout

柱式細(xì)菌DNAout（50次）

病毒DNA提取

96孔板病毒DNAout(離心法)（1次）

96孔板病毒DNAout(離心法)（5次）

96孔板病毒DNAout(真空法)（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

M13噬菌體單鏈基因組DNAout（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

λ噬菌體DNAout（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

一管式病毒DNA-RNAout

一管式病毒DNAout（200次）

一管式病毒DNAout（50次）

柱式病毒DNAout

經(jīng)典法質(zhì)粒DNA提取

96孔板質(zhì)粒DNAout(離心法)

Exonuclease I規(guī)格：4000 units

Exonuclease I規(guī)格：20000 units

Endonuclease IV, E.coli規(guī)格：100 units

RNase I規(guī)格：1000 units

RNase I規(guī)格：5000 units

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測定的吸光值過高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰，因此，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4．檢出限為100μmol/L。