HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86089-01(10×100ul)/BFNC86089-02(50×100ul)

HT115(DE3)：                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                   -80℃（6個月）

基因型

F- mcrA mcrB, IN(rrnD-rrnE)1 rnc14::Tn10(DE3 lavUV5::T7 polymerase)

產(chǎn)品說明

HT115(DE3)菌株是一類特殊的RNase III缺陷型大腸桿菌菌株，可以飼喂線蟲，主要用于秀麗隱桿線蟲（C. elegans）的RNAi干擾試驗。該菌株可以在LB或2YT培養(yǎng)基中正常生長，Tn10轉(zhuǎn)座子的存在使其具有四環(huán)素抗性。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，在IPTG存在時可誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶大量表達(dá)，進(jìn)而啟動線蟲ds RNA的表達(dá))，可同時表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，除了用于線蟲RNAi干擾試驗，也可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。

青旗生物生產(chǎn)的HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)0.5×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養(yǎng)液，37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

HT115(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

IPTG配制：

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 誘導(dǎo)時，IPTG濃度可根據(jù)實驗選擇使用（0.1-10mM）。

4. 進(jìn)行線蟲RNAi質(zhì)粒轉(zhuǎn)化時，抗生素使用濃度可參考：氨芐—50ug/ml，四環(huán)素—12.5ug/ml。

5. 若進(jìn)行蛋白表達(dá)，為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。